咬文嚼字：胤煌科技帶您精讀中國(guó)藥典2020版0903不溶性微粒檢查法

中國(guó)藥典2020版0903不溶性微粒檢查法：

本法系用以檢查靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射用無菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無菌原料藥中不溶性微粒的大小及數(shù)量。

（咬文嚼字1：上文說明一個(gè)事實(shí)，那就是靜脈用注射液如傳統(tǒng)的打吊瓶、屁股針、打疫苗及特殊病癥用藥如胰島素等注射液最終會(huì)進(jìn)入靜脈血管的，都需進(jìn)行不溶性微粒檢查。）

本法包括光阻法和顯微計(jì)數(shù)法。當(dāng)光阻法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定或供試品不適于用光阻法測(cè)定時(shí)，應(yīng)釆用顯微計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)定，并以顯微計(jì)數(shù)法的測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)。

（咬文嚼字2：不溶性微粒檢查法有兩種具體方法，第二種方法是第一種方法的結(jié)果驗(yàn)證，說明第一種方法在有些局限條件下是不準(zhǔn)確的。）

光阻法不適用于黏度過高和易析出結(jié)晶的制劑，也不適用于進(jìn)入傳感器時(shí)容易產(chǎn)生氣泡的注射劑。對(duì)于黏度過高，采用兩種方法都無法直接測(cè)定的注射液，可用適宜的溶劑稀釋后測(cè)定。

（咬文嚼字3：光阻法的實(shí)驗(yàn)操作局限性很多，無法允許實(shí)驗(yàn)員的細(xì)微實(shí)驗(yàn)誤差，如搖晃、震蕩、樣品沉積等，而顯微計(jì)數(shù)法對(duì)顆粒進(jìn)行清洗和分析，避免許多假性結(jié)果的影響。）

試驗(yàn)環(huán)境及檢測(cè) 試驗(yàn)操作環(huán)境應(yīng)不得引入外來微粒，測(cè)定前的操作應(yīng)在潔凈工作臺(tái)進(jìn)行。玻璃儀器和其他所需的用品均應(yīng)潔凈、無微粒。本法所用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑），使用前須經(jīng)不大于1.0μm的微孔濾膜濾過。

取微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）符合下列要求：光阻法取50ml測(cè)定，要求每10ml含10μm及10μm以上的不溶性微粒數(shù)應(yīng)在10粒以下，含25μm及25μm以上的不溶性微粒數(shù)應(yīng)在2粒以下。顯微計(jì)數(shù)法取50ml測(cè)定，要求含10μm及10μm以上的不溶性微粒數(shù)應(yīng)在20粒以下，含25μm及25μm以上的不溶性微粒數(shù)應(yīng)在5粒以下。

（咬文嚼字4：實(shí)驗(yàn)過程必須處于潔凈空間，無塵服和超凈臺(tái)就成了必bei環(huán)境，微粒檢查用水需要進(jìn)行測(cè)定符合要求后使用，但這還不算完，每次使用前還得經(jīng)不大于1μm的濾膜過濾，這是實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作的bi備條件。）

第一法（光阻法）（所需儀器：光阻法不溶性微粒儀）

測(cè)定原理 當(dāng)液體中的微粒通過一窄細(xì)檢測(cè)通道時(shí)，與液體流向垂直的入射光，由于被微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號(hào)降低，這種信號(hào)變化與微粒的截面積大小相關(guān)。

（咬文嚼字5：光阻法的測(cè)定原理是靠顆粒對(duì)光強(qiáng)的遮擋，然后將顆粒的最大截面等效為顆粒的大小，但顆粒的形狀千奇百怪，無法準(zhǔn)確判定顆粒的真實(shí)大小。）

對(duì)儀器的一般要求 儀器通常包括取樣器、傳感器和數(shù)據(jù)處理器三部分。

測(cè)量粒徑范圍為2～100μm，檢測(cè)微粒濃度為0～10000個(gè)/ml。

儀器的校準(zhǔn)  所用儀器應(yīng)至少每6個(gè)月校準(zhǔn)一次。

（1）取樣體積 待儀器穩(wěn)定后，取多于取樣體積的微粒檢查用水置于取樣杯中，稱定重量，通過取樣器由取樣杯中量取一定體積的微粒檢查用水后，再次稱定重量。以兩次稱定的重量之差計(jì)算取樣體積。連續(xù)測(cè)定3次，每次測(cè)得體積與量取體積的示值之差應(yīng)在±5%以內(nèi)。測(cè)定體積的平均值與量取體積的示值之差應(yīng)在±3%以內(nèi)。也可釆用其他適宜的方法校準(zhǔn)，結(jié)果應(yīng)符合上述規(guī)定。

（2）微粒計(jì)數(shù) 取相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于5%，平均粒徑為10μm的標(biāo)準(zhǔn)粒子，制成每1ml中含1000～1500微粒數(shù)的懸浮液，靜置2分鐘脫氣泡，開啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定3次，記錄5μm通道的累計(jì)計(jì)數(shù)，棄第一次測(cè)定數(shù)據(jù)，后兩次測(cè)定數(shù)據(jù)的平均值與已知粒子數(shù)之差應(yīng)在±20%以內(nèi)。

（3）傳感器分辨率 取相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于5%，平均粒徑為10μm的標(biāo)準(zhǔn)粒子（均值粒徑的標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1μm），制成每1ml中含1000～1500微粒數(shù)的懸浮液，靜置2分鐘脫氣泡，開啟攪拌器，緩慢攪拌使其均勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定8μm、10μm和12μm三個(gè)通道的粒子數(shù)，計(jì)算8μm與10μm兩個(gè)通道的差值計(jì)數(shù)和10μm與12μm兩個(gè)通道的差值計(jì)數(shù)，上述兩個(gè)差值計(jì)數(shù)與10μm通道的累計(jì)計(jì)數(shù)之比都不得小于68%。若測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定，應(yīng)重新調(diào)試儀器后再次進(jìn)行校準(zhǔn)，符合規(guī)定后方可使用。

（咬文嚼字6：光阻法儀器的傳感器經(jīng)常會(huì)不準(zhǔn)確，無法提供精確數(shù)據(jù)，且必須經(jīng)常校準(zhǔn)，校準(zhǔn)結(jié)果都在允許的偏差內(nèi)，說明該儀器的準(zhǔn)確度并不高，在當(dāng)前人們對(duì)生命安全越發(fā)重視的今天，醫(yī)藥研發(fā)并不允許出現(xiàn)如此多的誤差存在。）

如所使用儀器附有自檢功能，可進(jìn)行自檢。

檢查法

（1）標(biāo)示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規(guī)定外，取供試品至少4個(gè)，分別按下法測(cè)定：用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，先倒出部分供試品溶液沖洗開啟口及取樣杯，再將供試品溶液倒入取樣杯中，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣泡，置于取樣器上（或?qū)⒐┰嚻啡萜髦苯又糜谌悠魃希?。開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），每個(gè)供試品依法測(cè)定至少3次，每次取樣應(yīng)不少于5ml，記錄數(shù)據(jù)，棄第一次測(cè)定數(shù)據(jù)，取后續(xù)測(cè)定數(shù)據(jù)的平均值作為測(cè)定結(jié)果。

（2）標(biāo)示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規(guī)定外，取供試品至少4個(gè)，分別按下法測(cè)定：用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣泡，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免產(chǎn)生氣泡），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)，棄第一次測(cè)定數(shù)據(jù)，取后續(xù)測(cè)定數(shù)據(jù)的平均值作為測(cè)定結(jié)果。

（1）、（2）項(xiàng)下的注射用濃溶液如黏度太大，不便直接測(cè)定時(shí)，可經(jīng)適當(dāng)稀釋，依法測(cè)定。

也可采用適宜的方法，在潔凈工作臺(tái)小心合并至少4個(gè)供試品的內(nèi)容物（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣泡，置于取樣器上。開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少4次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。棄第一次測(cè)定數(shù)據(jù)，取后續(xù)3次測(cè)定數(shù)據(jù)的平均值作為測(cè)定結(jié)果，根據(jù)取樣體積與每個(gè)容器的標(biāo)示裝置體積，計(jì)算每個(gè)容器所含的微粒數(shù)。

（3）靜脈注射用無菌粉末除另有規(guī)定外，取供試品至少4個(gè)，分別按下法測(cè)定：用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），小心蓋上瓶蓋，緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣泡，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)；棄第一次測(cè)定數(shù)據(jù)，取后續(xù)測(cè)定數(shù)據(jù)的平均值作為測(cè)定結(jié)果。

也可采用適宜的方法，取至少4個(gè)供試品，在潔凈工作臺(tái)上用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，分別精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，小心合并容器中的溶液（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2分鐘或適當(dāng)時(shí)間脫氣泡，置于取樣器上。開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少4次，每次取樣應(yīng)不少于5ml，棄第一次測(cè)定數(shù)據(jù)，取后續(xù)測(cè)定數(shù)據(jù)的平均值作為測(cè)定結(jié)果。

（4）供注射用無菌原料藥按各品種項(xiàng)下規(guī)定，取供試品適量（相當(dāng)于單個(gè)制劑的最大規(guī)格量）4份，分別置取樣杯或適宜的容器中，照上述（3）法，自“精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內(nèi)容物溶解"起，依法操作，測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)，棄第一次測(cè)定數(shù)據(jù)，取后續(xù)測(cè)定數(shù)據(jù)的平均值作為測(cè)定結(jié)果。

（咬文嚼字7：藥典規(guī)定光阻法檢查前需“小心翻轉(zhuǎn)20次"、“混合均勻"、“緩緩振搖"等均可能產(chǎn)生氣泡、新的粒子、容器顆粒污染、新的化學(xué)反應(yīng)等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)誤差的情況出現(xiàn)，故不推薦使用光阻法。）

結(jié)果判定

（1）標(biāo)示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液除另有規(guī)定外，每1ml中含10μm及10μm以上的微粒數(shù)不得過25粒，含25μm及25μm以上的微粒數(shù)不得過3粒。

（2）標(biāo)示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料藥除另有規(guī)定外，每個(gè)供試品容器（份）中含10μm及10μm以上的微粒數(shù)不得過6000粒，含25μm及25μm以上的微粒數(shù)不得過600粒。

（咬文嚼字8：《中國(guó)藥典》對(duì)注射劑中不溶性微粒的控制僅限于粒徑≥10和25 μm的微粒數(shù)，對(duì)粒徑＜10μm的卻沒有具體要求，實(shí)際上，人體最小的毛細(xì)血管內(nèi)徑僅有4～7 μm，嬰、幼兒的毛細(xì)血管更細(xì)，只有粒徑在2 μm以下的微粒才可能通過腎交換被排出體外，而粒徑為2～10 μm的微粒無法被排出。微粒進(jìn)入體內(nèi)造成危害的部位一般多在肺、腦、腎、眼等處，較大的微粒會(huì)直接造成局部循環(huán)障礙、引起血管栓塞或?qū)е氯庋磕[，且有短期內(nèi)可見的特點(diǎn)，而粒徑為2～10 μm的微粒則可能造成潛伏性的更大危害。）

第二法（顯微計(jì)數(shù)法）（所需儀器：顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀）

對(duì)儀器的一般要求  儀器通常包括潔凈工作臺(tái)、顯微鏡、微孔濾膜及其濾器、平皿等。

潔凈工作臺(tái)  高效空氣過濾器孔徑為0.45μm，氣流方向由里向外。

顯微鏡  雙筒大視野顯微鏡，目鏡內(nèi)附標(biāo)定的測(cè)微尺（每格5～10μm）。坐標(biāo)軸前后、左右移動(dòng)范圍均應(yīng)大于30mm，顯微鏡裝置內(nèi)附有光線投射角度、光強(qiáng)度均可調(diào)節(jié)的照明裝置。檢測(cè)時(shí)放大100倍。

微孔濾膜  孔徑0.45μm、直徑25mm或13mm，一面印有間隔3mm的格柵；膜上如有10μm及10μm以上的不溶性微粒，應(yīng)在5粒以下，并不得有25μm及25μm以上的微粒，必要時(shí)，可用微粒檢查用水沖洗使符合要求。

檢查前的準(zhǔn)備  在潔凈工作臺(tái)上將濾器用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗至潔凈，用平頭無齒鑲子夾取測(cè)定用濾膜，用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗后，置濾器托架上；固定濾器，倒置，反復(fù)用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑）沖洗濾器內(nèi)壁，控干后安裝在抽濾瓶上，備用。

（咬文嚼字9：顯微計(jì)數(shù)法，顧名思義，借助顯微鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)，傳統(tǒng)的顯微鏡計(jì)數(shù)，通過印有格柵的標(biāo)準(zhǔn)濾膜進(jìn)行過濾干燥，人眼進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)，由于人工操作計(jì)數(shù)，成百上千的粒子在視野中呈現(xiàn)，會(huì)導(dǎo)致視覺疲勞最終引起實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤差，當(dāng)前市場(chǎng)上已經(jīng)有通過圖像算法進(jìn)行顆粒計(jì)數(shù)的顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀，無需人眼觀察計(jì)數(shù)，全程由計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理計(jì)數(shù)，結(jié)果準(zhǔn)確度高且方便快捷。）

檢查法

（1）標(biāo)示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規(guī)定外，取供試品至少4個(gè)，分別按下法測(cè)定：用水將容器外壁洗凈，在潔凈工作臺(tái)上小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，用適宜的方法抽取或量取供試品溶液25ml，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入經(jīng)預(yù)處理的濾器（濾膜直徑25mm）中。靜置1分鐘，緩緩抽濾至濾膜近干，再用微粒檢查用水25ml，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干，然后用平頭鑷子將濾膜移置平皿上（必要時(shí)，可涂抹極薄層的甘油使濾膜平整），微啟蓋子使濾膜適當(dāng)干燥后，將平皿閉合，置顯微鏡載物臺(tái)上。調(diào)好入射光，放大100倍進(jìn)行顯微測(cè)量，調(diào)節(jié)顯微鏡至濾膜格柵清晰，移動(dòng)坐標(biāo)軸，分別測(cè)定有效濾過面積上最長(zhǎng)粒徑大于10μm和25μm的微粒數(shù)。計(jì)算三個(gè)供試品測(cè)定結(jié)果的平均值。

（2）標(biāo)示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液除另有規(guī)定外，取供試品至少4個(gè)，用水將容器外壁洗凈，在潔凈工作臺(tái)上小心翻轉(zhuǎn)20次，使混合均勻，立即小心開啟容器，用適宜的方法直接抽取每個(gè)容器中的全部溶液，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入經(jīng)預(yù)處理的濾器（濾膜直徑13mm）中，照上述（1）同法測(cè)定。

（3）靜脈注射用無菌粉末及供注射用無菌原料藥除另有規(guī)定外，照光阻法中檢查法的（3）或（4）制備供試品溶液，同上述（1）操作測(cè)定。

結(jié)果判定

（1）標(biāo)示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液除另有規(guī)定外，每1ml中含10μm及10μm以上的微粒數(shù)不得過12粒，含25μm及25μm以上的微粒數(shù)不得過2粒。

（2）標(biāo)示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料藥除另有規(guī)定外，每個(gè)供試品容器（份）中含10μm及10μm以上的微粒數(shù)不得過3000粒，含25μm及25μm以上的微粒數(shù)不得過300粒。

（咬文嚼字10：顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒儀，可以將注射液中的不溶性微粒全部呈現(xiàn)在一張照片中，通過外表觀察及機(jī)器判斷，來追查出粒子的真實(shí)來源，并在往后的實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)中加以改進(jìn)或避免。不僅可以統(tǒng)計(jì)出藥典需求的顆粒數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，且可以觀察各個(gè)顆粒的真實(shí)長(zhǎng)寬高，從而為實(shí)驗(yàn)人員提供建議和意見。）